PCR试剂盒/PCR原料/分子RT酶IVD原料

RT-PCR逆转录酶/MMLV反转录酶

【产品名称】Magigen Magicscript 耐热逆转录酶 III

【产品编号】A003M

【包装规格】100,000U

【产品内容】

【美格RT酶的优点和特性】

本产品为基因重组技术克隆表达的莫洛尼鼠白血病病毒(Moloney Murine Leukemia Virus) 逆转录酶 (MMLV Reverse Transcriptase)。Magigen Magicscript 耐热逆转录酶 III 完全去除了 RNase H 活性，同时在不同的结构区域嵌合了不同种属的逆转录酶片段，本产品有极佳的热稳定性，在 65℃中，残留活性几乎可以达到 100%。

【逆转录酶活性定义】

以 Poly (rA)为模板，Oligo (dT)为引物，在 37℃条件下，10分钟内催化 1 nmol dTTP 掺入所需酶量定义为 1 Unit。

【逆转录酶储存条件及有效期】

-20℃密封保存，有效期 12 个月。

【美格RT-PCR逆转录酶使用方法】

使用示例（First Strand cDNA 合成）：

RT-PCR反应步骤：

1. 轻柔混匀反应体系；

2. 建议反应程序：

注 1：仅在使用 Random hexmers 时需要此步骤；

注 2：针对复杂结构或高 GC 的模板，可以提高反应温度至 55℃；针对长度超过 3 Kb 的 cDNA 片段，可以提高反应温度至 65℃, 有助于提高产量。

应用：所得的 cDNA 可直接用于 2nd-Strand cDNA 合成或者 PCR扩增。

热失活：80℃ ，20 min。

酶储存液：150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl (pH7.6), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.1% NP-40，50% Glycerol。

注意：

1. Magicscript 耐热逆转录酶 III 最适温度区域为 37-65℃，随着温度升高，残留活性会保持超过 95%；其 RNaseH 活性完全丧失，其反转产物长度可超过 12 kb；同时对高盐、脂肪、肝素等抑制物耐受能力明显增强；

2. 一步法反应中不建议使用耐热逆转录酶 III，因其含有特殊的活性结构域，虽然提高了逆转录效率、耐热性及准确性，但在金属离子、耐热逆转录酶 III、DNA 依赖性聚合酶同时存在的情况下会影响聚合酶活性。

研究人员在反转录复杂模板时可以提高反应温度以获得较佳的实验结果，同时可以根据实验设计自行优化各项参数或使用研究人员自行摸索的反应体系。

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