分子检测试剂盒

一步法RT-qPCR试剂盒

美格一步法RT-qPCR预混液试剂盒-实现对新冠病毒等病原体的安全快速检测

【产品编号】A019S

【产品名称】Magigen一步法 RT-qPCR 预混液 含UDG

【包装规格】100T

【产品内容】

产品组成                                            体积     

2× Reaction Buffer 5^a                      1.25 ml   

UDG-RT-qPCR Enzyme Mix^b           100 µl  

a. 包含 4nM Mg²⁺等；

b. 包含 MMLV Reverse Transciptase、RNase Inhibitor 以及 Hotstart Taq DNA Polymerase、热敏型UDG 酶等。

【Magigen RT-qPCR用途】

用于以 RNA 为模板的探针法定量 PCR 检测，推荐检测模板为样本提取的核酸。美格含UDG的一步法RT-qPCR预混液使得安全快捷一步完成新冠病毒等病原体检测与基因表达工作流程成为可能。

【RT-qPCR检测原理】

Magigen含UDG的RT-qPCR预混液整合了 Real Time RT-PCR 的反转录酶（MMLV Reverse Transciptase）、抗体修饰的热启动 DNA聚合酶（Hotstart Taq DNAPolymerase）和不耐热的 UDG酶，使用基因特异性引物（GSP）在单管中完成逆转录和 qPCR 反应，不需要额外的开管/移液操作，同时优化的缓冲体系中 dTTP 被 dUTP 替代，扩增后产物在下一次反应开始前会被降解，在反应开始后，UDG酶会快速失活，不影响后续反应，有效降低气溶胶污染风险。

【储存条件及有效期】

-20℃保存，有效期 12 个月。

【适用仪器】

SLAN 系列、MA6000 等国产荧光定量 PCR 仪；AB 系列、ROCHE 系列等荧光定量 PCR仪。

UDG-RT-qPCR如何操作

【UDG-RT-qPCR检验步骤】

以 SLAN-96P 为例

1. 在 RNase-free 离心管中配制反应混合液：

组分                                          体积(μL)

2× Reaction Buffer 5                      12.5

UDG-RT-qPCR Enzyme Mix II          1

Foward Primer(10μM)                     0.5

Reverse Primer(10μM)                    0.5

Probe(10μM)                                  0.25

模板 RNA                                        2

RNase-free Water                          Up to 25

a. 反应体系中引物、探针以及模板用量可自行调整，体系不足用 RNase-free Water 补齐；

b. 反应体系用量可根据如下原则进行调整：

1）反应体系中引物浓度在 0.2μM 即可有较好的扩增，扩增性能较差时，可在 0.1~1.0μM 进行调整；

2）探针浓度可在 50~250nM 进行调整。

2. 按照如下条件进行 One step UDG-RT-qPCR 反应：

步骤     温度     时间              循环数

1          50℃     15min            1

2          95℃     2.5min           1

3          95℃     15s               45

4          60℃     30s采集荧光

a. 延伸时间根据 Real Time PCR 仪所需的数据采集最短时间进行调整。

【UDG-RT-qPCR注意事项】

1. 本产品仅供科研使用，使用前请仔细阅读本说明书。

2. 使用前，待解冻后充分混匀并短暂离心；

3. 酶 Mix 使用前可短暂混匀并离心，准确吸取；

4. 请严格按照基因扩增实验室的管理规范进行实验操作，反应液的配制需使用RNase-free的枪头、反应管等。

5. 实验结束后，检测过程中所产生的废弃物应按照相关规范进行处理。

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