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人源蛋白质与文库相互作用的PCA筛选

2017-08-03

广州美格生物专业提供BiFC技术服务、BioID技术服务、CRISPR Cas蛋白。欢迎来电咨询。

蛋白质片段互补技术PCA技术原理

　　蛋白质在细胞中往往不是独立完成其功能，而是通常与其他蛋白质相互作用形成复合物，从而在特定的时间和空间内完成特定的功能。了解蛋白质间的相互作用，特别是大规模高通量地筛选蛋白质间的相互作用，进而描绘出蛋白间相互作用的网络图谱，对揭示一个蛋白质的功能和最终阐明细胞中各种生命活动的分子机制有无可取代的重要意义。

　蛋白质片段互补技术(protein complementation assay, PCA) 是一种直观、快速地分析在活细胞中蛋白质之间相互作用及定位的新技术。该方法的机理如下: 结构完整的蛋白质才能实现其功能。然而，当将功能蛋白分割分成了 N 和 C端两半时，任何一半均不能单独发挥作用，但若在空间上距离足够近就可以互补恢复原有功能。将N 和 C端两个不具有活性的片段分别与目标蛋白连接，如果两个目标蛋白有相互作用，就使得被分割的功能蛋白的两个片段在空间上相互靠近并重新形成有功能活性的蛋白，通过检测活性即可判断目标蛋白是否发生相互作用。本公司根据不同实验的需要，用于PCA的功能蛋白有荧光素酶和荧光蛋白等。

美格生物PCA技术特点与优势　

　本公司的PCA文库包括了18000个人类蛋白，可以高速便捷地筛选人类细胞中的蛋白互作，也可以筛选病原蛋白与人类宿主蛋白之间的互作。本公司以蛋白质片段互补技术为基础高通量筛选蛋白质间相互作用，获得了国家发明专利，有如下特点和优点：

1、在活细胞中直接、原位检测蛋白质间相互作用。

2、灵敏度高，足以检测与内源性表达水平相当的蛋白质间相互作用。

3、能检测到短暂的，间接的蛋白质间相互作用。

4、利用生物信息学软件，方便快捷地生成生信分析结果和绘制蛋白相互作用网络图谱。

美格生物PCA技术步骤：

1. 将待测基因克隆入含功能蛋白N端的表达载体构建诱饵质粒；

2. 将诱饵质粒转化细胞，选择被转化的细胞；

3. 再将文库质粒（含18000个人类基因，已克隆入含功能蛋白C端的表达载体）转化到表达诱饵质粒的细胞中；

4. 通过流式细胞仪或荧光素酶报告系统高通量筛选和鉴定与诱饵相互作用的蛋白。

5. 生物信息学分析结果，给出与诱饵蛋白相互作用的蛋白列表。

6. 提交实验报告（包括实验操作流程，数据、图表），提交与诱饵蛋白相互作用的蛋白列表。

7. （可选）通过两两之间相互作用的PCA或细胞免疫荧光或免疫共沉淀进一步验证与诱饵相互作用的蛋白

由客户提供序列正确的基因克隆及其相关信息。如果诱饵蛋白基因克隆在本公司文库以内，则不需要提供。

周期：每个蛋白质与文库相互作用的PCA筛选实验周期为90个工作日。
服务完成时提交：
1). 技术服务报告（实验操作流程，数据、图表）
2). 与诱饵蛋白相互作用的蛋白列表。

发表文章：

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