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生效日期：2022/3/15 版本号：22V2
超灵敏新冠病毒全基因组靶向扩增试剂盒
【包装规格】20T
【产品编号】CM006020
【预期用途】
无需病毒分离培养，从病例标本、环境样本或培养毒株核酸中靶向扩增新型冠状病毒基因组，结合Illumina或Nanopore高通量测序平台完成病毒基因组测序；实验结果仅供基础研究参考。本产品仅适用于科研用途。
【检测原理】
新冠病毒基因组结构
新冠病毒测序流程
（本试剂盒为逆转录和多重PCR过程）
| 新冠病毒全基因组靶向测序方案 |
| 逆转录、多重PCR |
| | |
| Nanopore | illumina (Miniseq/Miseq) | |
| | | | | |
| Nanopore RBK004测序建库试剂盒 | Nextera XT DNA Library Prep Kit | |
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| 6-8小时完成病毒全基因组测序 | 24小时完成病毒全基因组测序 | |
| 测序数据结合IPH-Nano, CLC等软件完成病毒基因组拼接和分析 |
本试剂盒针对新冠病毒基因组序列设计多重PCR扩增引物，首先对病毒RNA进行逆转录，随后利用多重PCR引物对新冠病毒的全基因组进行靶向扩增。仅需少量RNA即可获得新冠病毒全基因序列，可完美对接二代测序和三代测序平台，结合IPH-Nano测序分析软件轻松获得新冠病毒基因组序列及变异位点信息。
【产品组分】
组分名称 | 规格 | 数量 | 储存及运输 |
RT Mix | 80μl | 1管 | 冷冻运输； -20℃保存；有效期1年。 |
PCR Mix | 1000μl | 1管 | |
Primer Pool 1 | 160μl | 1管 | |
Primer Pool 2 | 160μl | 1管 | |
Primer Pool 3 | 160μl | 1管 |
【适用仪器】
本试剂扩增在ABI、伯乐等普通PCR仪器上进行，反应产物可上二代测序仪和三代测序仪进行建库测序。
【样本要求】
呼吸道标本：鼻咽拭子、深咳痰液、肺泡灌洗液、肺组织活检标本等，以上标本经核酸提取后用于全基因组捕获。
【实验步骤】
逆转录
在 0.2ml PCR 管配制以下反应体系，按以下条件反应
试剂名称 | 体积 | 温度 | 时间 |
RT Mix | 4μL | 25℃ | 10min |
Viral RNA | 16μL | 50℃ | 10min |
Total | 20μL | 85℃ | 5min |
4℃ | hold |
2. PCR 扩增
在 0.2ml PCR 管配制以下反应体系，轻弹试管混合，瞬时离心，按以下反应条件。
试剂名称 | 体积 | 温度 | 时间 | 循环数 |
PCR Mix | 12.5μL | 98℃ | 30s | 1 |
Primer Pool 1/2/3 | 4μL | 98℃ | 15s | 20-35 |
Nuclease-free water | 6μL | 65℃ | 5min | |
Template cDNA | 2.5μL | 4℃ | ∞ | 1 |
Total | 25μL |
注 2：PCR 循环数。
CT 值 | Illumina 建库 | Nanopore 建库 |
<20 | 20 | 25 |
20-28 | 25 | 30 |
>28 | 28 | 35 |
【注意事项】
实验结果仅供基础研究参考；本产品属于科研用试剂，仅适用于科研用途，不能用于诊断或治疗；
检测结果与样本的收集、保存、处理及RNA 提取密切相关， 请妥善进行该过程；
请谨慎处理样本，防止感染；
临床实验室应该严格按照《临床基因扩增实验室工作规范》中的要求配备设备及操作人员，应严格按照说明书要求进行操作。
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