如何用慢病毒感染细胞？
一、慢病毒转染细胞的步骤
慢病毒转染细胞基本操作
1、 实验前一天， 以每毫升 3-5 ×104 个目的细胞接种 96 孔培养板中的 12 孔， 体积为90ul。不要使用边上的孔， 保持细胞状态良好；
2、 感染预实验共分为四组， 每组三个不同的 MOI： 1 × 108 TU/ml、 1× 107 TU/ml、 1×106 TU/ml；
3、 实验开始， 配备 1 ×108 TU/ml、 1×107 TU/ml、 1×106 TU/ml， 如病毒滴度为 1 ×108 TU/ml，取 5ul 病毒液稀释到 45ul 的 ENi.S.中， 在进行一次 10 被稀释即可。
4、 取 2ul10mg/mlpolybrene 稀释到 400ul， 备用；
5、 将 10ul 三个不同梯度的病毒加到各组的相应孔中；
6、 再设定需要添加 polybrene 的孔中加入 10ul polybrene 稀释液；
7、 混匀后继续培养， 8-12 小时候观察细胞生长状态， 并更换为新鲜培养基；
8、 感染 3-4 天后， 观察荧光表达情况
9、 通过细胞感染效果， 确认目的细胞的感染条件和感染参数。 选取效果最优的一组实验条件按相同的实验方法进行正式转染实验。
二、 慢病毒转染悬浮细胞实验方法
如何用 慢病毒转染悬浮细胞
1、在 2×105/ml 悬浮细胞中加入 polybrene 至 6 μ g/ml 和适量病毒， 充分混匀。37℃孵育。或者 150g 室温离心 4 小时(选作， 部分难转染的细胞系采用此步骤可以提高转染效率)。
2、 (对 polybrene 毒性敏感的细胞选作此步骤 ) 4 小时后(或离心结束后)加入等体积新鲜培养基以稀释 polybrene。
3、 继续培养 3‐4 天。 中间视细胞生长情况可传代或换液
三、 慢病毒转染贴壁细胞实验方法
如何用慢病毒转染贴壁细胞
1、 慢病毒转染前 18‐24 小时， 将贴壁细胞以 1×105/孔铺到 24 孔板中。 使细胞在慢病毒转染时的数量为 2×105/孔左右。
2、 第二天， 用含有 6 μ g/ml polybrene 的 2ml 新鲜培养基替换原培养基， 加入适量病毒悬液。 37℃孵育。
3、(针对 polybrene 毒性敏感的细胞选作此步骤 ) 4 小时后加入 2ml 新鲜培养基以稀释 polybrene。
4、 继续培养 24 小时， 用新鲜培养基替换含有病毒的培养基。
5、 继续培养。 如果慢病毒含有荧光蛋白， 一般转染 48 小时后可见明显荧光表达， 72 小时后更加明显。 如需 FACS 检测转染效率， 可在转染后 72‐96 小时进行。 如果慢病毒含有抗性基因并且需要加药筛选， 可以在转染 3‐4 天后开始加药。
以上方法仅供参考，具体可以根据实际情况进行适当的调整。
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