常温细胞
1. T25细胞培养瓶收货后，拆开外包装，用75%酒精消毒T25瓶表面，放37℃培养箱静置2-4h；
2. 吸走大部分培养基并留10-12 ml，显微镜下拍照保存细胞状态照片，观察细胞密度，若细胞密度大于80%即可按比例传代（首次传代比例建议1：2），若细胞密度低于70%可以留10-12 ml继续培养至细胞密度80%以上再进行传代培养；
冻存细胞
1. 细胞收货后尽快开箱检查，若干冰充足可以取出细胞迅速置于-80℃冰箱（2-3天内复苏）短期保存或液氮中长期保存，若干冰完全挥发建议立即复苏细胞并联系销售人员解决；
2. 冻存细胞建议尽快复苏一管培养检查，以免超出售后期，复苏步骤参考复苏攻略；
3. 复苏一管细胞出现异常及时联系销售人员，在专业技术支持的指导下进行下一步操作；
美格君Tips：
1. 细胞收货出现漏液、培养瓶破损、干冰完全挥发等异常情况时，及时拍照联系销售人员；
2. 该细胞贴壁生长，T25细胞培养瓶运输过程中经常出现大量细胞脱落并聚团的情况，细胞脱落建议按以下步骤处理：
收货发现细胞脱落聚集，可以将所有细胞收集起来，在50ml离心管内离心，上清保存备用，再用PBS重悬细胞，尽量吹散后离心弃上清。沉淀用1mL胰酶重悬，放37度消化2min，先轻轻吹散细胞，再加4ml左右完全培养基终止消化吹散细胞至无肉眼可见团块，离心弃上清，加第一步保存的培养基重悬后接种到新的培养瓶。由于贴壁较弱细胞消化时间本身较短，注意必须控制消化时间和吹打力度，避免细胞消化或吹打死亡过多导致无法正常贴壁生长。由于运输会脱落的细胞本身贴壁较弱，建议使用高贴附培养瓶或提前包被过的培养瓶培养细胞。
1. 先尽量吸干净T25瓶原培养基，再加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；
2. T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层，将培养瓶放入37度培养箱消化；
3. 消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；
4. 混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；
5. 加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里，补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；
美格君Tips：
1. 对于消化细胞程度，客户如果经验不多，无法准确掌控胰酶作用时间，建议客户按照下述操作：胰酶首先复温到室温后加入细胞，放入37度培养箱，然后每隔30秒，即吹打下细胞（此时吹打细胞应尽量轻柔，不能强行将细胞吹下，否则细胞可能出现机械损伤），如果能够吹打散细胞，说明细胞消化完成可以终止消化，如果30秒吹打不下，再等30秒重复操作直至能够轻柔的吹下细胞；293T细胞贴壁较弱，所以消化时间会比常规贴壁细胞短很多，注意控制消化时间；
2. T25瓶加10-12ml完全培养基，10cm皿加12-15ml，2-3天换液一次。
3. 细胞收货后首次传代建议按1：2传代，后续培养可以视具体细胞生长状态和密度情况决定传代比例；
4. 传代后24h建议观察细胞并换液一次去除死亡细胞；
1. 先将细胞按传代步骤消化、离心，至传代步骤4，弃细胞上清，获得细胞沉淀；
2. 加入适量预先配好的程序性冻存液轻轻重悬细胞，并将细胞悬液转移至做好标记的冻存管中；
3. 将冻存管放入程序性冻存盒，放入-80℃冰箱过夜；
4. 转移细胞至液氮保存并登记细胞保存位置，液氮保存24h后建议复苏一管检测冻存细胞的活性，若活性合格即可长期保存，若低于80%建议重新冻存；
美格君Tips：
1. 检测冻存细胞活性结果未合格前，培养瓶内细胞建议继续培养直至确认冻存合格方可视需要丢弃；
2. 程序性冻存液需要配合程序性冻存盒使用，若使用非程序冻存液可以按产品说明书处理降温过程；
3. T25培养瓶长满通常可以冻存2-3管，10cm皿长满可以冻存3-4管；
1. 将所需的完全培养基放在培养箱预热30min后开始复苏；
2. 准备37度温水，将细胞从液氮罐取中出，观察管内无液氮的情况下，捏住管盖，将细胞冻存部分浸入温水轻轻摇晃，融化至米粒大小冰块，终止水浴；
3. 将冻存管以离心力150g(约900rpm)左右离心1-2min，不同离心机具体转速会有差异；
4. 离心完成后弃冻存液，用刚才预热的培养基缓慢加入冻存管，并轻柔重悬细胞后接种至T25或者10cm皿中，轻轻混匀后放入培养箱；
5. 24h后观察细胞并换液一次，放回培养箱继续培养；
美格君Tips：
1. 冻存管在液氮长期保存过程中难免渗入液氮，取出细胞时震动不要过大，水浴前一定要观察管内是否存在液氮，若有液氮建议静置一会待液氮完全蒸发后再水浴；
2. 水浴时可以使用一次性PE手套包住冻存管避免直接接触水源，可以降低管盖缝隙渗入水导致污染的概率；
3. 水浴至剩米粒大小时及时终止水浴，避免过度水浴或水浴时间不足；
4. 建议水浴完成后直接在离心管内离心细胞，避免再次转移细胞；
5. 复苏后的细胞比较脆弱，吹打和转移细胞时尽量轻柔，复苏24h后换液去除死亡细胞；
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